Transfección mediante vehículos génicos basados enhidroxiapatita: eficacia y efectos sobre el tráfico intracelular
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| Formato: | tesis de maestría |
| Fecha de Publicación: | 2019 |
| Descripción: | La hidroxiapatita (HAp), Ca10(PO4)6(OH)2, es un mineral miembro de las apatitas con una razón Ca/P de 1,67. Es el principal componente mineral de los huesos en los vertebrados y posee una serie de características de interés como biocompatibilidad, bioresortividad, afinidad por biomoléculas, alto potencial osteogénico, osteconductividad, osteoinductividad y baja toxicidad. Estas propiedades son ideales para su aplicación en sistemas biológicos. Debido a esto se han estudiado sus aplicaciones como acarreador de biomoléculas (ácidos nucleicos y proteínas). Las nanopartículas de hidroxiapatita sintetizadas por electrólisis poseen ventajas de producción como su versatilidad, rapidez, bajo costo y capacidad de incluir sustancias dopantes, sin alterar significativamente sus propiedades. Mediante este método se han sintetizado nanopartículas capaces de transfectar células y al doparlas con Europio3+ (HAp-Eu), pueden ser utilizadas como sondas fluorescentes. En este trabajo, las nanopartículas de HAp mostraron resultados positivos al ser utilizadas para la transfección de células HEK 293, mientras que en células HeLa y Raw se observan rendimientos moderados. De la misma forma, no se observaron efectos sobre la proliferación de las células HEK 293, Raw 264.7 ni THP-1; sin embargo, en células HeLa si se observó un efecto citostático. Al estudiar la endocitosis por células HeLa se observó una internalización activa de la HAp-Eu. Esta captura fue heterogénea, ya que algunas células solo contenían trazas de las nanopartículas y otras mostraban grandes cúmulos de distribución perinuclear. Además, se observó que existe colocalización de la señal de HAp-Eu con los lisosomas, lo cual siguiere que este material transita por las vías degradativas intracelulares. Adicionalmente, se observó evidencia de que la HAp y HAp-Eu pueden inducir alteraciones del flujo autofágico, siendo este efecto dependiente del linaje celular. Finalmente, se observó que el rendimiento de las transfecciones de fagocitos profesionales (macrófagos Raw 264.7) no era afectado por la activación clásica (M1) con LPS, lo cual apoya la idea de que, en caso de aplicación sistémica a un organismo vivo, la captura de las nanopartículas por fagocitos no impedirá la expresión del material genético exógeno, aún en ambientes inflamatorios. Estos resultados apoyan el potencial para el uso de las nanopartículas como vehículos génicos y sondas fluorescentes, ya que las propiedades químicas y biológicas las hacen compatibles con posibles aplicaciones a nivel clínico. |
| País: | Kérwá |
| Institución: | Universidad de Costa Rica |
| Repositorio: | Kérwá |
| OAI Identifier: | oai:https://www.kerwa.ucr.ac.cr:10669/80381 |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/10669/80381 |
| Access Level: | acceso abierto |