Caracterización de la región promotora del gen omp25 de Brucella abortus. - Castillo Zeledón, Amanda (2010)
La brucelosis es una enfermedad zoonótica, producida por bacterias del género Brucella. Muchos de los mecanismos que utiliza esta bacteria para invadir y replicarse en las células no se comprenden. Sin embargo, las propiedades de la membrana externa y el sistema de regulación de expresión de genes BvrR/BvrS están ligados a su virulencia. La Omp25 es una de las proteínas de membrana externa más estudiadas. Aunque su función es desconocida, su expresión es regulada por el sistema de regulación BvrR/BvrS que es importante para la virulencia. El objetivo de este trabajo fue la caracterización de la región promotora del gen omp25, como prototipo de secuencias promotoras que constituirían un regulón de virulencia bajo el control de BvrR/BvrS. Para ello, se realizaron fusiones transcripcionales de la región corriente arriba del gen omp25 con el gen reportero lacZ carente de promotor. Una primera fusión contenía 392 pb (pares de bases) corriente arriba de omp25, asimismo, se clonaron dos fragmentos más cortos que contenían 262 pb y 151 pb de la misma región. La expresión de las fusiones transcripcionales en la cepa silvestre Brucella abortus 2308 fue evaluada durante las distintas fases del crecimiento bacteriano. Estos ensayos demostraron la presencia de actividad promotora en dos de los constructos y una notoria disminución de más del 90% en la expresión del gen con el constructo que contenía 151 pb, delimitando la región que posee las secuencias para la activación del promotor. Por lo tanto, existe una actividad promotora basal en las 151 bp corriente arriba de omp25, que es positivamente regulada por secuencias que se encuentran luego de las 152 bp corriente arriba de omp25. Esta caracterización sirve como modelo para realizar estudios comparativos con regiones reguladoras de otros genes importantes para Brucella, crear herramientas que permitan controlar la expresión de éstos y por lo tanto, combatir a este patógeno.